干貨分享：T3檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）應(yīng)用及檢測限

更新時間：2026-01-27

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T3檢測試劑盒

（酶聯(lián)免疫法）

貨號：RJ20828

線性范圍：0.62-40 ng/mL

1. 預(yù)期用途

本試劑盒設(shè)計(jì)用于定量檢測血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清、細(xì)胞裂解物等樣本中的待測物濃度，僅供研究使用，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

2. 檢測原理

試劑盒采用競爭法原理：將合成半抗原包被于酶標(biāo)板上，同時加入樣品和抗體試劑（一抗），樣品中的待測物與半抗原上偶聯(lián)的待測物競爭結(jié)合抗體（一抗），結(jié)合形成“半抗原-抗體"免疫復(fù)合物，清洗去除游離的免疫復(fù)合物后，加入TMB顯色，樣本中待測物濃度越高藍(lán)色越淺，加入終止液，用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物含量呈反比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中待測物的濃度。

3. 包含的實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料

名稱 Label	組成成分 Kit Components	數(shù)量（48T） Quantity	數(shù)量（96T） Quantity
酶標(biāo)板	預(yù)包被半抗原的酶標(biāo)板	8×6條	8×12條
校準(zhǔn)品（10×）	10倍濃縮校準(zhǔn)品（400 ng/mL）	1支×200μL	1支×300μL
一抗抗體	即用型檢測抗體	1支×3mL	1支×6mL
酶標(biāo)二抗	HRP標(biāo)記二抗抗體	1瓶×6mL	1瓶×12mL
通用稀釋液（20×）	樣品/校準(zhǔn)品/一抗抗體通用稀釋液	1支×10mL	1支×15mL
濃縮洗液（20×）	20倍濃縮洗液	1支×15mL	1支×25mL
顯色劑	TMB、過氧化氫	1支×6mL	1支×10mL
終止液	稀硫酸	1支×3mL	1支×6mL

如需單獨(dú)采購通用型組分，請?zhí)峁?yīng)的組分名稱。

4. 需要但未包含的實(shí)驗(yàn)材料

· 蒸餾水或去離子水，一次性離心管、一次性手套等耗材；

· 移液器、多通道移液器及配套槍頭；

· 燒杯、量筒、試劑瓶等容器具；

· 用于封貼微孔板的封板膜或其他替代材料；

· 微孔板振蕩器（如有需要）、離心機(jī)、旋渦振蕩器等輔助設(shè)備；

· 恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)。

5. 試劑的準(zhǔn)備及儲存

· 1×洗液的配制：濃縮洗液（20×）如有晶體析出，需在37℃下加熱至晶體全部溶解后使用。用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL濃縮洗滌液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。

· 1×通用稀釋液的配制：用蒸餾水1:20稀釋，例如：10mL的20×濃縮通用稀釋液加入190mL的蒸餾水，混合均勻。

· 工作校準(zhǔn)品的配制：校準(zhǔn)品開封前應(yīng)離心30秒，確保所有校準(zhǔn)品集中于底部；

準(zhǔn)備7個離心管，將10×校準(zhǔn)品按需吸取一定量用“1×通用稀釋液"稀釋10倍配制成校準(zhǔn)品S1。例：50uL的10×校準(zhǔn)品+450uL的“1×通用稀釋液"，制備得到500μL的S1濃度校準(zhǔn)品。在隨后的6個離心管中分別加入250μL的“1×通用稀釋液"，在這6個試管中（S2~S7）將S1校準(zhǔn)品依次倍比稀釋6個梯度至S7，共配制7個濃度的校準(zhǔn)品，依次為：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如下圖所示，“1×通用稀釋液"作為零濃度校準(zhǔn)品S0，共8支校準(zhǔn)品。

6. 樣品采集、預(yù)處理及儲存

· 血清：使用血清采集管采集全血，室溫靜置待血細(xì)胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下離心15分鐘取得血清。操作應(yīng)柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血清應(yīng)及時進(jìn)行檢測，如不能及時進(jìn)行檢測，應(yīng)等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時間不超過6個月，樣品凍融不超過2次。

· 血漿：使用EDTA或肝素采血管收集血漿。全血采集后以1000×g離心15分鐘取得血漿。操作應(yīng)柔和，避免溶血發(fā)生。獲取的血漿應(yīng)及時進(jìn)行檢測，如不能及時進(jìn)行檢測，應(yīng)等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時間不超過6個月，樣品凍融不超過2次。

· 組織：組織稱重后剪碎，將剪碎的組織加入裂解液，一般按1:4-1:9的重量體積比，比如100mg的組織樣品對應(yīng)400uL的裂解液，具體可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，最后將勻漿液于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。

· 細(xì)胞：取適量細(xì)胞，于冰上進(jìn)行超聲破碎，5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。

· 細(xì)胞上清：取細(xì)胞上清于5000×g離心5-10分鐘，取上清檢測。

7. 實(shí)驗(yàn)步驟

使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右，也可置于37℃溫箱快速回溫至室溫。

注意：酶標(biāo)板未恢復(fù)室溫前，請勿開封。

1	每孔加入校準(zhǔn)品/待測樣品50μL，之后每孔再加入一抗抗體工作液50uL。
2	蓋上封板膜，在37℃下孵育60分鐘。
3	洗板5次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標(biāo)板，在干凈的吸水紙上拍干。
4	每孔加入100μL酶標(biāo)二抗。
5	蓋上封板膜，在37℃下孵育30分鐘。
6	洗板5次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標(biāo)板，在干凈的吸水紙上拍干。
7	每孔加入100μL顯色液
8	37℃下避光孵育15分鐘。
9	每孔加入50μL終止液。
10	使用酶標(biāo)儀在450nm檢測波長及620~690nm參比波長條件下測定吸光度值，如果沒有參比波長則僅選擇450nm波長進(jìn)行檢測。如果最高濃度校準(zhǔn)品OD值過高，應(yīng)立即在405/630nm雙波長條件下檢測。